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通过研究活细胞中蛋白质之间的相互作用,可以开发出旨在抑制蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)的化合物,以调节正常和疾病组织中的生物过程。我们已经成功地使用NanoBRET™系统(Promega)检测活细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用。NanoBRET™是一种基于邻近性的分析方法,通过测量从生物发光蛋白供体到荧光蛋白受体的能量转移,可以检测蛋白质相互作用。使用低水平表达的全长蛋白使PPI监测和筛选研究能够反映真实的细胞生理学。NanoBRET™是一种可逆的检测方法,使研究蛋白质相互作用的诱导和抑制成为可能。

例子:

利用该系统,我们在HEK-293细胞中筛选了Schnurri-3 (sn -3) ERK-2 PPI抑制剂。

MEK蛋白与shin -3竞争与ERK-2结合

ERK-2抑制剂的竞争与ERK-2结合并阻止了Shn-3的结合

复合抑制sn -3 - erk -2相互作用的频率分布

在NanoBRET shin -3 - erk -2分析中筛选的56 × 384孔板的Z’因子

对初级分析中化合物的重新测试

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