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流式细胞术是用于检查细胞或颗粒特性的普遍技术。它可以在几秒钟内同时分析相同细胞中相对尺寸,内部复杂性,相对荧光强度等的多个参数。细胞通过聚焦激光束以产生包括光散射和荧光的光学信号,这是对它们的特征。有各种技术平台,如Guava®(Merck Millipore),FACS(Becton Dickinson)和Attune NXT(Thermo Fisher),可成功测量细胞的物理和化学性质。Aurelia Bioscience的科学家在使用这些平台上有很好的经验丰富,用于各种细胞分析应用范围,范围从表型对细胞健康和活力进行了测量。

申请包括:

在用荧光染料缀合的抗体标记并通过流式细胞术分析时,细胞表面标记可用于定义细胞亚型以及功能。在PMA刺激后染色HL-60细胞以诱导分化为巨噬细胞表型。在10和100nm的PMA治疗中可以看到增加的CD11B表达。此外,用7-AAD共染色细胞,当细胞膜完整性损失时被细胞溶解,表明细胞活力降低。

流式细胞术可用于检测和量化细胞群中的细胞凋亡水平随时间。在Nocodazole治疗(24Hrs)之后,将THP-1细胞染成膜蛋白V和7-AAD。虽然Annexin V的表达是凋亡的早期标志物,但与7-AAD共染色导致膜完整性受损的核染色特征(例如坏死细胞)。

使用流式细胞术评估细胞增殖的各种方法,例如在DNA合成(Brdu和EDU)期间,标记细胞周期相关蛋白(例如Ki-67和PC​​NA)和染料稀释测定(例如CFSE染色)。在IL-2 / CD3-CD28耗尽之后用CFSE染色人T细胞。图中的每个峰值代表了对每个新一代观察到的细胞分裂和减少的荧光强度。

在给定的人群中,细胞将分布在细胞周期的三个主要阶段中:G0 / G1,S和G2 / M相。在每个阶段,存在的DNA量变化。可以使用荧光DNA污渍测量DNA含量,所述荧光DNA污渍表现出与DNA质量成比例的发射信号。然后使用这些染色种群的流式细胞术分析来产生频率直方图,揭示细胞周期的各个阶段。将THP-1细胞用Nocodazole处理24小时,然后用碘化丙啶染色细胞。顶部的直方图显示了非同步细胞的标准型材,底部显示了G2 / m的Nocodazole诱导的分裂遗留。

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