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我们的科学家在过去6年使用康宁Epic、PerkinElmer EnSpire和SRU Bioscience Bind仪器在应用于细胞分析的无标签技术方面有深入的经验。

这些系统将光学生物传感器集成到微滴度板中,以测量细胞对刺激的反应。具体来说,该系统能够检测传感器表面的质量变化,这些变化是由于细胞形状的改变和/或蛋白质的募集或迁移到/从膜。

该技术是通用的,独立于信号通路,它是非侵入性的(不需要分子生物学),并在几秒钟、几分钟或几小时内产生动态反应,从而产生丰富的信息读出。

无标记技术非常适合于测量原生或生理相关系统的反应,如原始人类和动物细胞,而不需要过度表达或通过基因修饰进行放大。这对于理解受体在其自然环境中的分子药理学有很大的好处,而重组系统并不一定具有自然耦合或利用正确的信号通路。

在没有简单/标准的生物读数的地方,无标签技术也可能有好处,例如,受体的去孤儿化和药理学“工具”化合物的鉴定。

我们的团队已经开发了7个跨膜受体(7TMR)(或GPCR)靶点的检测方法,进行了高通量筛选和机制研究。

我们已经使用康宁史诗系统筛选了一些7-TMR靶点,包括两个双偶联受体(Gi/Gq和一个Gs/Gi偶联)的激动剂筛选。

公开的概念证明:比较了一份同行评审的杂志中关于毒蕈碱受体拮抗剂筛选的无标记和钙通量读数输出。(参考:受体与信号转导杂志,2009;29日(3 - 4):163 - 172)

比较无标记与FLIPR数据产生的毒蕈碱受体识别拮抗剂化合物。

使用表达毒蕈碱受体的CHO细胞以拮抗剂模式筛选100000种化合物。将无标签分析产生的抑制数据与使用FLIPR在钙通量筛选中测试的相同化合物的数据进行比较。两组数据的相关性突出显示了一组“命中”化合物,它们是无标签分析(C组)所独有的。

我们已经开发并验证了在普通细胞背景和原始人类和动物细胞中靶标的分析方法。无标记测定法已被用作正交筛选方法,用于更多的标准筛选测定。

在一次试验中鉴定作为激动剂、拮抗剂或反向激动剂的化合物。

用化合物刺激重组细胞系,在15分钟内测量无标记反应以确定激动性。然后用EC80浓度的标准激动剂刺激细胞,并在接下来的45分钟内测量任何拮抗剂的效果。圆圈突出显示用于XC50计算的数据点。

我们的经验扩展到开发人类中性粒细胞的检测方法,以测量对一系列刺激(如趋化因子)的反应(参考ELRIG 2007报告)。

人中性粒细胞对白细胞介素-8 (IL-8)的实时反应

采用密度梯度离心法从献血者全血中分离出中性粒细胞,并镀到384孔生物传感器板中。IL-8以不同剂量添加到井中(如图所示),并在25分钟内测量反应。

我们对PerkinElmer EnSpire多模式阅读器进行了评估。该台式仪器是一个无标签的平台,适用于分析开发和中低通量筛选。
该仪器能够从平板的同一孔中依次测量荧光和发光响应之外的无标记响应。因此,它可以用于以细胞为基础的多重复杂分析,测量数秒、数分钟或数小时的动力学反应。

7-TMR生物学以外的目标应用包括:

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